H2S 含量測定試劑盒說明書 |
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H2S 含量測定試劑盒說明書注意：正式測定之前選擇預期差異大的樣本做預實驗規格: 100T/96S 產品內容：提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。 試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。 試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。 試劑三：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。 試劑四：液體 1mL×1 管，4℃避光保存。 標準品：粉劑 3mg×1 管，4℃避光保存 產品說明：微量法
H2S 是一種新型氣態信號分子，存在于腦內的神經遞質，生理濃度的 H2S 對神經系統海馬的 長時程增強功能具有重要的調節作用，并對自發性高血壓、出血性休克及肝硬化等疾病的過程發揮著重要的病理生理效應。 H2S 與醋酸鋅、N, N-二甲基對苯二胺和硫酸鐵銨等反應生成亞甲基藍，亞甲基藍在 665nm 處有大吸收峰，通過測定其吸光值可計算 H2S 含量。 需自備的儀器和用品：天平、低溫離心機、可見分光光度計或酶標儀、微量比色皿或96孔板、蒸餾水。 操作步驟：一、樣品處理： a. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 b. 細菌、真菌：按照細胞數量（10 4 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。 c. 血清（漿）：直接測定。 二、測定步驟： （取 1.5ml 離心管，按照下表操作）
d. 臨用前將標準品加入1ml試劑一充分溶解則為12.5μmol /mL H2S標準品溶液，稀釋100倍后為0.125μmol /mL標準品溶液
三、H2S 含量計算公式：
H2S含量（μmol /mg prot）=0.125×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白) ÷Cpr
H2S含量（μmol /g）=0.125×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白) ÷W
H2S含量（μmol /104 cell）=0.125×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管) ÷細胞數量
H2S含量（μmol /mL）=0.125×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)
注意事項：如樣本OD值大于標準品OD，可稀釋樣本或增大標準品濃度 |
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